RT-PCR Mix for qPCR（預混型逆轉錄試劑盒）
貨號：R1031 ??規格：100次（20?μl反應體系）
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產(chǎn)品說(shuō)明
RT-PCR Mix for qPCR是預混型逆轉錄反應試劑盒，操作簡(jiǎn)便，可快速高效完成逆轉錄反應。其中Enzyme Mix含有高效逆轉錄酶和熱敏型DNase，一步完成基因組DNA的清除以及RNA的逆轉錄反應，RT Buffer包含逆轉錄反應所需的其他組分，無(wú)需分步多次加樣，降低了樣品污染的風(fēng)險。同時(shí)，本試劑盒配備了Control Mix，用于陰性對照反應，檢驗RNA模板中是否有基因組DNA殘留。本試劑盒的逆轉錄產(chǎn)物對染料法和探針?lè )晒舛縋CR反應均有很好的兼容性，可進(jìn)行精準的基因表達分析。
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產(chǎn)品組分
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組分 |
R1031（100次） |
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Enzyme Mix |
100 μl |
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5X RT Buffer |
400?μl |
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Control Mix |
20 μl |
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RNase-free ddH2O |
1 ml?×?2 |
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保存條件
各組分均-20℃保存，并避免反復凍融。
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適用范圍
第一鏈cDNA?合成
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注意事項
l?本品含有熱敏型DNase，請于冰上使用本品各組分。
l?為保證成分均勻，請將Enzyme Mix、5X RT Buffer及Control Mix分別瞬時(shí)離心、吹打混勻后再吸取使用。
l?在操作過(guò)程中，注意防止引入RNase導致RNA降解。RNA最好保存于-70℃，避免反復凍融。
l?cDNA產(chǎn)物應置于-20℃或以下保存，避免反復凍融。
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操作步驟
1.?配制反應體系
按以下體系，在冰浴的無(wú)菌無(wú)酶離心管中配制反應混合液：
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組分 |
用量 |
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5X RT Buffer |
4?μl |
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Enzyme Mix |
1?μl |
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RNA |
1pg-1μg |
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RNase-free ddH2O |
補足至20?μl? |
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陰性對照反應（可選）
即不加逆轉錄酶的反應，產(chǎn)物用于在qPCR中作為陰性對照，檢驗模板RNA中是否有基因組DNA殘留
按以下體系，在冰浴的無(wú)菌無(wú)酶離心管中配制反應混合液：
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組分 |
用量 |
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5X RT Buffer ? |
4?μl |
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Control Mix |
1?μl |
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RNA |
1pg-1μg |
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RNase-free ddH2O |
補足至20?μl? |
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2.?進(jìn)行逆轉錄反應
將上述混合液吹打混勻，瞬時(shí)離心收集至管底。按以下程序，在PCR儀中進(jìn)行反應：
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溫度 |
時(shí)間 |
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50℃ |
15 min |
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85℃ |
5 sec |
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3. qPCR反應及cDNA保存
cDNA產(chǎn)物可稀釋后立即進(jìn)行染料法或探針?lè )╭PCR反應。若使用未稀釋的cDNA原液，則體積不能超過(guò)反應體系的1/10，以避免抑制反應效率。長(cháng)期保存cDNA產(chǎn)物應于-20℃或以下環(huán)境中，并避免反復凍融。
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